冷冻保存的健康支持细胞与非梗阻性无精子症 (NOA) 患者的睾丸组织在含有卵泡刺激素 (FSH)/睾酮的培养基中共培养对生殖细胞成熟没有优势

不同的细胞培养条件和技术已用于使生精细胞成熟，以提高体外受精的成功率。

 支持细胞 (SC) 对于维持精子发生至关重要，FSH 刺激通过直接或间接作用于 SC 来发挥其作用。

其他研究已证明添加到共培养物中的 FSH 和睾酮的有效性，可提供睾丸微环境条件并有助于精原干细胞 (SSC) 的成熟和减数分裂进展。在本研究中，我们研究了在 NOA 病例中，健康 SC 与患者睾丸组织在补充 FSH/睾酮的培养基中共培养是否有利于生殖细胞的分化和成熟（N = 34）。

在患有梗阻性无精子症的男性 (N = 12) 中，对睾丸活检中的健康 SC 进行鉴定和纯化，然后冷冻保存。使用 GATA4 和波形蛋白特异性抗体，通过流式细胞术 (FC) 和免疫组织化学对健康 SC 进行表征。采用 FITC 标记的膜联蛋白 V/PI 染色和 MTT 测定来比较冷冻前后 SC 的活力和增殖。

在膜联蛋白V染色中，未发现活SC和凋亡SC的百分比存在差异，并且MTT显示与冷冻前状态相比，冷冻保存并没有抑制SC增殖。然后，来自 NOA 患者的组织样本在两个单独的环境中进行处理，其中包含 FSH/睾酮和 FSH/睾酮加与解冻的健康 SC 共培养 7 天。FC 用于测量精原细胞 (VASA)、减数分裂细胞 (CREM) 和减数分裂后细胞（鱼精蛋白 2 和顶体蛋白）中表达的特定标记物的第 7 天水平。与 OA 组相比，不孕患者的 VASA 和顶体素基础水平较低（分别为 8.2% vs. 30.6% 和 12.8% vs. 30.5%；p < 0.05）。与治疗前的测量结果相比，在 FSH/睾酮环境中的第 7 天，CREM 水平增加了 58.8%，顶体素水平增加了 195.5% ( p < 0.05)。同样，在与健康 SC 的培养基共培养中，到第 7 天，CREM 和顶体素水平分别增加至 92.2% 和 204.8% ( p < 0.05)。尽管两组的 VASA 和鱼精蛋白水平均有所增加，但并未达到显着水平。在含有 FSH/睾酮的培养基或另外与健康 SC 共培养的培养基中，第 7 天 CREM、VASA、顶体素和鱼精蛋白 2 的增加率没有发现显着差异（58.8% vs. 92.2%、120.6% vs. . 分别为 79.4%、195.5% 与 204.8%、232.3% 与 198.4%；p> 0.05）。我们的结果表明，在补充有 FSH 和睾酮的培养基中，患者自身 SC 的存在对于生殖细胞的成熟来说是足够的，与健康 SC 共培养并不具有额外的优势。此外，冻融过程不会损害 SC 的活力和增殖。